目的
1．學(xué)習(xí)微生物涂片和染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌簡單染色法；
2．學(xué)習(xí)無菌操作，并鞏固顯微鏡的使用方法；
3．學(xué)習(xí)在油鏡下觀察細(xì)菌的個體形態(tài)。
原理
    由于細(xì)菌體積小、菌體透明，活體細(xì)胞內(nèi)含有大量水分，且對光線的吸收和反射與周圍背景沒有顯著的明暗差，因而很難在普通光學(xué)顯微鏡下觀察它們的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。只有經(jīng)過染色，借助顏色的反襯作用才可看清菌體形態(tài)以及菌體表面結(jié)構(gòu)。染色技術(shù)是觀察微生物形態(tài)結(jié)構(gòu)的重要手段。
   能夠使微生物著色的化合物被稱為染色劑，染色劑一般都是成鹽化合物。目前普遍采用的微生物染色劑多為苯的衍生物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)中除含有苯環(huán)外，還連接有發(fā)色團(tuán)和助色團(tuán)。發(fā)色團(tuán)可使化合物顯色，而助色團(tuán)則能增加色度，并因具有電離特性，可與菌體細(xì)胞相結(jié)合，從而使其著色。
   含有酸性助色團(tuán)（如羥基-OH）的染色劑稱為酸性染色劑，其電離后分子帶負(fù)電，可與鈉、鉀、鈣、氨等離子結(jié)合，多用于細(xì)胞質(zhì)的染色，如酸性品紅、剛果紅等。含有堿性助色團(tuán)（如氨基-NH2）的染色劑稱為堿性染色劑，其電離后分子帶正電，主要用于細(xì)胞核和異染粒等酸性細(xì)胞結(jié)構(gòu)的染色。由于細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中布滿核物質(zhì)和異染粒等結(jié)構(gòu)，因此細(xì)菌染色一般采用堿性染色劑，通常包括氯化物、硫酸鹽、醋酸鹽或草酸鹽等。
   細(xì)菌的簡單染色，即只利用一種染色劑使菌體著色。此法操作簡單，適用于細(xì)菌形態(tài)的觀察。通常細(xì)菌的簡單染色也采用堿性染色劑，如結(jié)晶紫或堿性品紅等，堿性染料不是堿而是一種鹽，電離時染料離子通常帶正電荷。而在中性、堿性或弱酸性的溶液中，細(xì)菌細(xì)胞通常帶有負(fù)電荷，這樣帶正電荷的染料離子就容易與帶負(fù)電荷的菌體細(xì)胞相結(jié)合并使其著色。染色后便于觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小和排列方式等特征。

材料
1．菌種：大腸桿菌（Esecherichia coli）
金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）
2．染料：草酸銨結(jié)晶紫染液。
3．其它：載玻片，無菌水，洗瓶，擦鏡紙，吸水紙，二甲苯或無水乙醚：無水乙醇（3：1）混合液，香柏油及接種用具。
方法
一、細(xì)菌的簡單染色
1．涂片：在潔凈的載玻片中央滴1 小滴無菌水，用無菌接種環(huán)（火焰滅菌）挑取少量大腸桿菌或金黃色葡萄球菌分別與無菌水充分混合，涂成極薄的菌膜；（注意：菌量不宜過多，否則菌體堆積成塊不易看清個體形態(tài)?。?/span>
2．固定：手執(zhí)玻片一端，將有菌膜的一面朝上，通過微火3-4 次，使水分蒸干；（注意：可用手背接觸涂片反面，以不燙手為宜。否則過分烘烤會導(dǎo)致菌體變形?。?/span>
3．染色：將玻片置于玻片架上，待其冷卻后，在涂片部位滴加適量（蓋滿菌膜）的草酸銨結(jié)晶紫染液，染色1 分鐘；
4．水洗：傾去染液，用普通蒸餾水自玻片一端輕輕沖洗，至流下的水中無染液的顏色為止。
5．干燥：用吸水紙吸去多余水分；（注意：勿擦去菌體！）
6．鏡檢：在低倍鏡下找到視野后，轉(zhuǎn)換油鏡觀察，繪制大腸桿菌和金黃色葡萄球菌形態(tài)圖；
7．清理：實(shí)驗(yàn)完畢后，清潔油鏡頭，整理顯微鏡使其復(fù)原并在記錄本上登記。將染色片放入含有5%苯酚的廢片缸中。
二、油鏡的使用和清理
1．油鏡的使用：
（1）在低倍鏡下找到鏡檢部位后，用粗螺旋將鏡筒提升約2 厘米，將油鏡轉(zhuǎn)置鏡筒正下方；
（2）在鏡檢部位滴上1 滴香柏油；
（3）從側(cè)面注視，用粗螺旋將鏡筒小心降下，使油鏡侵入香柏油中，讓鏡頭幾乎與標(biāo)本相接；（注意：不要用力過猛以免壓碎玻片損壞鏡頭?。?/span>
（4）從目鏡觀察，調(diào)節(jié)光線使其明亮，再調(diào)節(jié)細(xì)螺旋使鏡筒緩慢提升，直至視野內(nèi)出現(xiàn)清晰物象為止。
2．油鏡的清理：
   觀察完畢，提升鏡筒。先用擦鏡紙拭去鏡頭上的油，接著用另一張擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上殘留的油跡，最后用干凈擦鏡紙?jiān)俨潦脙杀橐猿埩舻亩妆?。涂片處?/span>柏油的處理與此相同。（注意：不要過量使用二甲苯，以免其殘留在鏡頭上影響觀察?。?/span>
結(jié)果
分別繪出油鏡下大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的形態(tài)圖，注明放大倍數(shù)，并描述它們的排列方式。