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纖維蛋白原與凝血酶
源葉生物 / 2020-11-02

 一、纖維蛋白原

    纖維蛋白原(Fibrinogen,Fg),即凝血因子Ⅰ,其分子量約340KD,由α、β、γ三對不同多肽鏈所組成,多肽鏈間以二硫鍵相連。α-鏈分子量63.5 kDa β-鏈分子量56 kDa γ鏈分子量47 kDa (約含4% 碳水化合物)。在凝血酶作用下,α鏈與β鏈分別釋放出A肽與B肽,生成纖維蛋白單體。在此過程中,由于釋放了酸性多肽,負(fù)電性降低,單體易于聚合成纖維蛋白多聚體。但此時單體之間借氫鍵與疏水鍵相連,尚可溶于稀酸和尿素溶液中。進一步在Ca2+與活化的ⅩⅢ因子作用下,單體之間以共價鍵相連,則變成穩(wěn)定的不溶性纖維蛋白凝塊,完成凝血過程。

源葉產(chǎn)品牛血纖維蛋白原(貨號:S12024

 

 

 

纖維蛋白原溶液在50℃以上變性,因此加熱溫度不宜超過50℃;另外,纖維蛋白原一般應(yīng)采用37℃的生理鹽水溶解,溶解時溫度不宜過低,在4℃條件下以及不含鹽的溶液中難以溶解。

 

 

 

 

 

 

二、凝血酶

凝血酶(Thrombin)來源于牛血漿,分子量37KD,是由兩條肽鏈(31KD6KD)通過二硫鍵組成的。凝血酶是凝血酶原(凝血因子Ⅱ)激活后形成的蛋白質(zhì)水解酶,其催化纖維蛋白原(fibrinogen)水解掉A肽和B肽,由此形成纖維蛋白單體,單體進一步聚合,在血小板、紅細(xì)胞和白細(xì)胞等參與下形成血凝塊。

源葉產(chǎn)品凝血酶(貨號:S10117

 

 

 

產(chǎn)品特點:

1、純度高:SDS-PAGE檢測圖譜無明顯雜蛋白條帶;

2、比活高:比活力大于2000單位/mgpr

3、不含有其他蛋白酶活性;

 

 

三、牛血纖維蛋白原檢測凝血酶效價

纖維蛋白原溶液的制備  取纖維蛋白原,用0.9%氯化鈉溶液制成含0.1%凝固物的溶液。

標(biāo)準(zhǔn)凝血酶溶液的制備  取凝血酶標(biāo)準(zhǔn)品,用0.9%氯化鈉溶液溶解分別定量稀釋制成每1ml中含5.0單位、6.4單位、8.0單位、10.0單位的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

供試品溶液的制備  取本品5瓶,分別用0.9%氯化鈉溶液溶解并定量轉(zhuǎn)移至同一量瓶中,混勻,稀釋至刻度,再用0.9%氯化鈉溶液定量稀釋成與標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的濃度。

測定法 取內(nèi)徑1cm、長10cm的試管4支,各精密加入纖維蛋白原溶液0.9ml,置37℃±0.5℃水浴中保溫5分鐘,再分別精密量取上述4種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液各0.1ml,迅速加入上述各試管中,立即記時、搖勻,置37℃±0.5℃水浴中,觀察纖維蛋白的初凝時間,每種濃度測5次,求平均值(5次測定之最大值與最小值的差不得超過平均值的10%,否則重測)。標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度應(yīng)控制凝結(jié)時間在14秒~60秒為宜。以標(biāo)準(zhǔn)品效價(單位)的對數(shù)為橫坐標(biāo),凝結(jié)時間(秒)的對數(shù)為縱坐標(biāo),進行直線回歸(r≥0.99)。精密吸取供試品溶液0.1ml,按上述方法平行測定5次,求出凝結(jié)時間的平均值(誤差要求同標(biāo)準(zhǔn)曲線),用線性回歸方程求得單位數(shù),計算,即得。

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