一、簡介
牛血清白蛋白,簡稱BSA,是一種來源于牛血清的球蛋白,在牛血清總蛋白中含量能達(dá)到60%。它是由一種單鏈多肽蛋白,包含了583個(gè)氨基酸殘基,分子量約為66.4kD。
牛血清白蛋白外觀為白色至類白色凍干粉末,易溶于水,難于鹽析,等電點(diǎn)4.8。水溶液加熱至60-70℃時(shí),蛋白即凝固沉淀。
源葉產(chǎn)品線分為兩種貨號分別是:S12012、s25762。
二、制備方法
1、冷乙醇法:這是最早發(fā)明的分離BSA的方法,在1940年由哈佛大學(xué)的Cohn發(fā)明,所以又稱之為“Cohn′s method”。 Cohn利用不同的溫度和不同的乙醇濃度進(jìn)行多步蒸餾分離,最后將血清分離成五個(gè)組份,其中第五組分含有最多的白蛋白,從而BSA又稱之為“第五組份”。
2.熱休克法:heat-shock熱激是通過控制溫度和過濾來分離白蛋白。因乙醇有易揮發(fā)和危險(xiǎn)性,從而在幾個(gè)關(guān)鍵步驟用熱代替乙醇。熱休克法生產(chǎn)的BSA
產(chǎn)量高,純度也高,逐漸取代Cohn法成為BSA分餾主要方法,但熱休克法中采用的加熱,也使的BSA蛋白溶液變性,活性低。
3.色譜層析法(Chromatographic)法:是目前BSA生產(chǎn)最為先進(jìn)的方法,也是最為溫和的方法;主要包括三個(gè)步驟,超濾,離子交換色譜層析和硫酸銨沉淀;該方法先進(jìn),但與其他方法比成本較高。
三、應(yīng)用
牛血清白蛋白資源豐富,容易制得,且價(jià)格低廉,在生化實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域中有著相當(dāng)廣泛的應(yīng)用。
1. 首先,BSA在牛血液中主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養(yǎng)作用,因而在動(dòng)物細(xì)胞無血清培養(yǎng)中,添加BSA可起到生理和機(jī)械保護(hù)作用和載體作用。
2. BSA還是一種穩(wěn)定劑和載體。在一些限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中,添加BSA,能起到“保護(hù)”或“載體”的作用,不少酶類添加 BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶,加入BSA一般也不會(huì)受到什么影響。
3.在Western blot實(shí)驗(yàn)中,BSA溶液是一種最常用的封閉液。BSA可以與表面上的空白位置結(jié)合,同樣以機(jī)械填補(bǔ)(堆積)和吸附覆蓋的方式結(jié)合在膜上,通過“填補(bǔ)”和“覆蓋”蛋白結(jié)合位點(diǎn),以避免一抗的非特異結(jié)合,從而起到封閉的作用。
4.無脂肪酸BSA,一般用于脂肪代謝相關(guān)分析的載體蛋白,也可以與某種特異性的脂肪酸結(jié)合以形成白蛋白,可應(yīng)用于增強(qiáng)細(xì)胞培養(yǎng)體系的性能。若實(shí)驗(yàn)室中脂肪或者脂肪酸的存在影響激素或者膽固醇的讀書時(shí),無脂肪酸BSA是首選產(chǎn)品。
5.近年來,在藥物研究方面,也有了許多應(yīng)用研究。很多學(xué)者通過藥物與BSA的相互作用機(jī)制研究,來獲得藥物與血清白蛋白內(nèi)部之前結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系的重要信息。